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應(yīng)用范圍：膜電位染色

產(chǎn)品參數(shù) 

外觀：可溶于 DMSO 或 DMF 的橘紅色固體 

λEx/λEm (MeOH) = 482/497 nm 

CAS 號(hào)：905-96-4 

分子式：C21H21IN2O2 

分子量：460.31 

分子結(jié)構(gòu)圖：

貯存條件 -20℃ 避光保存，保質(zhì)期一年。

產(chǎn)品介紹 

DiOC2(3) (3,3′-Diethyloxacarbocyanine, 碘化物)是一種廣泛應(yīng)用的膜電位探針。如用于線粒體膜電位的研究，DiOC2(3) 能夠穿透真核細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，在濃度低于 100 nM 時(shí)，染料在具有活躍膜電位的線粒體中積累，形成紅色熒光聚集體，當(dāng)使用破壞線粒體膜電位的（如 CCCP ）處理細(xì)胞時(shí)，DiOC2(3) 染色強(qiáng)度降低。

DiOC2(3) 染色的細(xì)胞可以通過流式細(xì)胞儀的藍(lán)色激發(fā)， 綠色和紅色發(fā)射可視化。該試劑可與其他試劑搭配使用，例 如紅色激發(fā)的 Annexin V–APC，用于活力和凋亡的研究。

使用方法（線粒體膜電位檢測(cè)） 

DiOC2(3) 標(biāo)記細(xì)胞

由于細(xì)胞類型、培養(yǎng)條件的差異以及應(yīng)用方向的不同，建議起始濃度 50 nM 摸索最佳染色條件。 

將 DiOC2(3) 溶于無(wú)水 DMSO 配制成 100 mM 的儲(chǔ) 液：向管中加入 435 μL 的無(wú)水 DMSO，充分溶解。每次實(shí)驗(yàn)前，需將儲(chǔ)液充分渦旋混勻。

開始實(shí)驗(yàn)前，將 DiOC2(3) 和 CCCP 恢復(fù)至室溫。

1.1 用預(yù)熱的培養(yǎng)基、磷酸鹽緩沖液或其他緩沖液重懸細(xì)胞，使細(xì)胞最終密度為 1×10^6 個(gè)/mL。 

1.2 設(shè)置對(duì)照，向管中加入 1 μL CCCP 溶液至終濃度為 50 μM，37℃孵育 5 min。 

注：CCCP 可以和 DiOC2(3) 同時(shí)添加。為了獲得不同細(xì)胞類型的最佳效果，可能需要滴定 CCCP。

1.3 配置合適濃度的 DiOC2(3)工作液，加入工作液至終濃度為 50 nM，37℃ 孵育 15-30 min。如果進(jìn)行其他標(biāo)記，如用 Annexin V 結(jié)合物標(biāo)記，請(qǐng)執(zhí)行步驟 2.1；如果不需要其他染色，請(qǐng)繼續(xù)執(zhí)行以下步驟。 

1.4 （可選）清洗細(xì)胞一次，向每個(gè)細(xì)胞管中加入適量預(yù)熱的 PBS 緩沖液。 

1.5 1000 rpm 離心 5 min 1.6 向每個(gè)管中加入 500 μL PBS 緩沖液，輕彈管壁使其重懸。

1.7 使用 YF488 染料的發(fā)射濾光片在 488 nm 激發(fā)下進(jìn)行流式分析。用 CCCP 處理的樣品調(diào)節(jié)補(bǔ)償。

Annexin V 結(jié)合物額外標(biāo)記 

可以用額外的標(biāo)記方法檢測(cè) DiOC2(3) 染色后細(xì)胞的凋亡及生存狀態(tài)。如用 Annexin V–APC 標(biāo)記：

2.1 向步驟 1.3 的細(xì)胞中加入適量預(yù)熱的 PBS 緩沖液洗 滌細(xì)胞一次。 

2.2 1000 rpm 離心 5 min，然后重懸于 100 μL 1×Annexin 結(jié) 合緩沖液中。 

2.3 加入 5 μL Annexin V 結(jié)合物（如 Annexin V–APC）。 

2.4 37℃ 孵育 15 min。

2.5 加入 400 μL Annexin 結(jié)合緩沖液。 

2.6 用適合于 YF488/PI 和 YF633 染料的發(fā)射濾光片在 488 nm 和 633 nm 激發(fā)下進(jìn)行流式分析。

注意事項(xiàng) 

1. 熒光染料均存在淬滅問題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。 

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。