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產(chǎn)品內(nèi)容：

儲(chǔ)存條件 -20℃ 避光保存，有效期見外包裝。 

光譜特性 NucGreen: Ex/Em: 503/530 nm (with DNA) EthD-III: Ex/Em: 530/620 nm (with DNA)

產(chǎn)品介紹 

Live & DeadTM Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Cells 包含兩種熒光染料，NucGreen 是綠色核酸染料，可染色活細(xì)菌和死細(xì)菌；EthD-III 是紅色核酸染料，僅染色細(xì)胞膜受損的死細(xì)菌。將 NucGreen 和 EthD-III 適當(dāng)混用，具有完整細(xì)胞膜的細(xì)菌呈現(xiàn)綠色，而具有受損細(xì)胞膜的細(xì)菌在不同通道下可分別呈現(xiàn)綠色和紅色。 

細(xì)菌活力的常見標(biāo)準(zhǔn)是在合適的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖的能力，稱為生長(zhǎng)測(cè)定。本試劑盒通常與在液體或固體培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果有著很好的一致性。然而，在某些條件下，膜損傷的細(xì)菌可能會(huì)在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中恢復(fù)并繁殖，而這種細(xì)菌在本測(cè)定中會(huì)被認(rèn)定死菌。相反，一些具有完整膜的細(xì)菌可能無法在營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中繁殖，但在本測(cè)定中會(huì)被認(rèn)認(rèn)定活菌。因此，若本試劑盒檢測(cè)結(jié)果和細(xì)菌生長(zhǎng)測(cè)定之間有較大的差異，應(yīng)考慮上述可能。

實(shí)驗(yàn)方法 

以下實(shí)驗(yàn)方案以 Escherichia coli 為例： 

1. 在合適的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)菌至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)晚期。 

2. 向 EP 管中加入 1 mL 的菌液，5,000 ×g 離心 15 min。 

3. 去除上清液，加入 1 mL 的 0.85% NaCl 溶液重懸細(xì)菌。 

4. 5,000 ×g 離心 15 min，去除上清，加入 1 mL 的 0.85% NaCl 溶液重懸細(xì)菌。重復(fù)一次。 

5. 將菌懸液密度調(diào)整到 108 個(gè)細(xì)菌/ mL（OD670≈0.03）。 

6. 配制染色工作液：取 1 μL 的 NucGreen 和 2 μL 的 EthD-III，充分混勻后，加入 8 μL 的 0.85% NaCl 溶液。 

7. 取 1 mL 菌懸液，加 10 μL 的染色工作液。充分混合，室溫避光孵育 15 min。 

8. 染色結(jié)束后，取 10 μL 菌懸液滴加在帶有 18 mm 方形蓋玻片的載玻片上，盡快拍照，避免干片。 

9. 熒光顯微鏡成像。綠色熒光可使用 FITC 適用濾光片觀 察，紅色熒光可使用 PI 適用濾光片觀察。